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免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)

Co-IP:是一種利用抗原抗體相互作用的免疫學(xué)原理來研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典

實(shí)驗(yàn)方法，它可以確定兩種蛋白在完整細(xì)胞內(nèi)生理?xiàng)l件下是否存在相互作用。

原理：

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。其原理是：當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。

優(yōu)點(diǎn)為：

（1）相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài)；

（2）蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的，可以避免人為的影響；

（3）可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。

缺點(diǎn)為：

（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用；

（2）兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；

（3）必須在實(shí)驗(yàn)前預(yù)測目的蛋白是什么，以選擇后檢測的抗體，所以，若預(yù)測不正確，實(shí)驗(yàn)就得不到結(jié)果，方法本身具有冒險(xiǎn)性。

免疫共沉淀（Co-IP）實(shí)驗(yàn)?步驟：

1.試劑準(zhǔn)備，樣品收集

2.免疫沉淀反應(yīng)后，在進(jìn)行電泳

3.通過免疫共沉淀確定結(jié)合蛋白

免疫共沉淀（Co-IP）實(shí)驗(yàn)?結(jié)果展示：

實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1.實(shí)驗(yàn)周期: 2-5周

2.交付標(biāo)準(zhǔn): WB顯色圖、原始膠片、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)步驟、試劑、儀器等)

需確認(rèn)的信息

1.樣本種屬及類型

2.目的蛋白及ID號

3.是否提供--抗

4.樣本數(shù)量及分組信息

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