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苯丙氨酸解氨酶試劑盒說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù):1373 更新時(shí)間:2020-03-13

苯丙氨酸解氨酶試劑盒說(shuō)明書(shū)

紫外分光光度法

貨號(hào):YJS2205                                         規(guī)格:50管/48樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

PAL(EC4. 3 1 5)廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中,是植物體內(nèi)苯丙烷類代謝的關(guān)鍵酶,與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關(guān),在植物正常生長(zhǎng)發(fā)育和抵御病菌侵害過(guò)程中起重要作用。PAL催化L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在290nm處有大吸收值,通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率計(jì)算PAL活性。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1ml比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體60mL×1瓶4保存

試劑一:液體40mL×1瓶,4保存;

試劑二:粉劑×3瓶,4保存,臨用前每瓶加入4mL雙蒸水充分溶解待用;現(xiàn)配現(xiàn)用。

試劑三:液體2.5mL×14保存;

操作步驟:

一、粗酶液提取:   

稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿10000g,4離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定操作表:

試劑名稱

測(cè)定管(μL)

對(duì)照管(μL)

樣本

20

 

試劑

780

800

試劑

200

200

混勻,30準(zhǔn)確水浴30min

試劑

40

40

混勻,靜置10min后,用對(duì)照管調(diào)零,290nm處記錄測(cè)定管吸光值A(chǔ)  (A=A測(cè)定管-A對(duì)照管)。

PAL活性計(jì)算:

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白在每ml反應(yīng)體系中每分鐘使290nm下吸光值變化0.1定義為一個(gè)酶活力單位。

PAL(U/mg prot)=A×反應(yīng)總體積(1040μL)÷樣本體積(20μL)÷反應(yīng)時(shí)間(30min)÷0.1 ÷蛋白濃度(mg/mL)=17.3×A ÷蛋白濃度(mg/mL)

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織在每ml反應(yīng)體系中每分鐘使290nm下吸光值變化0.1定義為一個(gè)酶活力單位。

PAL(U/g 鮮重)=A×反應(yīng)總體積(1040μL)÷樣本鮮重(g)×樣本體積(20μL)÷V樣總(1mL)﹞÷反應(yīng)時(shí)間(30min)÷0.1 =17.3×A ÷樣本鮮重(g)

流式雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)代做報(bào)價(jià)

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)